Extraction d'ARN totaux
   
Les ARN totaux sont extraits à l'aide du kit Tri Reagent (EUROMEDEX). Environ 100 mg de tissu végétal broyé dans de l'azote liquide sont homogénéisés dans 1 ml de Tri Reagent. Le mélange est vigoureusement agité pendant 3 fois 3 min avec une pause d'environ 1 min entre les reprises. Après 5 min d'incubation à température ambiante, le mélange est centrifugé 15 min à 12000 g et à 4°C. 200 µl de chloroforme sont ajoutés à la phase aqueuse et le mélange est vigoureusement agité pendant 15 sec et ensuite centrifugé 15 min à 12000 g et à 4°C. A la phase aqueuse, contenant les ARN, transférée dans un nouveau tube, sont ajoutés 500 µl d'isopropanol. Après 10 min d'incubation à température ambiante, le mélange est centrifugé 10 min à 12000 g et à 4°C. Le surnageant est éliminé et 1 ml d'éthanol 70% est ajouté au culot. Après 5 min de centrifugation à 7500 g, l'éthanol est éliminé, le culot séché à l'air et les ARN repris dans 20 µl d'eau traitée au DMPC.
La vérification de la qualité ainsi que la quantification des ARN est réalisée par le système d'électrophorèse capillaire couplé à un réseau de microfluidique Experion (BIORAD). Les ARN sont conservés à -80°C jusqu'à leur utilisation.
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